Перекрестный метод определения группы крови

Определение группы крови необходимо для безопасного проведения трансфузии. Смешение несовместимых групп крови в результате трансфузии может привести к тяжелым и даже смертельным последствиям. При трансфузии кровь донора и реципиента должна совпадать по системе AB0, по резус-фактору (Rh /Rh-) а также по системе Келл (Kell). Групповая принадлежность крови в системе AB0 определяется наличием или отсутствием групповых антигенов (A, B) на внешней мембране эритроцитов и присутствием или отсутствием соответствующих им антител (анти-A, анти-B) в сыворотке крови. Существует четыре комбинации: группа крови 0 - на эритроцитах отсутствуют групповые антигены A и B, в сыворотке крови присутствуют антитела анти-A и анти-B; группа крови А - на эритроцитах присутствуют антигены А, в сыворотке крови присутствуют антитела анти-B; группа крови В - на эритроцитах присутствуют антигены В, в сыворотке крови присутствуют антитела анти-A; группа крови АВ - на эритроцитах присутствуют и антигены А и антигены B, в сыворотке крови антитела анти-A и анти-B отсутствуют. Определение группы крови по системе AB0 может быть осуществлено прямым и перекрестным методом. Оба метода основаны на реакции прямой гемагглютинации - склеивания эритроцитов и образованием визуально наблюдаемых красных аггрегатов - глобул или хлопьев. При прямом методе типирования используются стандартные изогемагглютинирующие сыворотки или цоликлоны и эритроциты определяемой крови. При перекрестном методе определения группы крови применяются стандартные эритроциты и сыворотка определяемой крови. Перекрестный метод позволяет выявлять наличие соответствующих антител в сыворотке крови. Для проведения типирования группы крови необходимо следующее оборудование и расходные материалы: лабораторный стол, лампа, планшет для иммуногематологических исследований (стеклянный, пластиковый или фарфоровый, желательно белый, с лунками или без), стеклянные пробирки, стеклянные палочки, песчаные часы на 3 и 5 минут, физраствор, цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ и стандартные эритроциты 0, А и B. Также необходимы средства индивидуальной защиты - медицинские перчатки, очки. Любые препараты крови следует рассматривать как потенциальные источники инфекционных заболеваний. Порядок проведения исследования: Перед началом исследования планшет маркируется уникальным идентификатором (ФИО пациента, номер или код образца); Поскольку для перекрестного метода необходима сыворотка крови, исследуемый образец оставляют в покое на 20-30 минут; На планшете размечаются шесть позиций в два ряда по три позиции: первый ряд - анти-А, анти-В, анти-АВ; второй ряд - 0, А, B; Цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ наносятся по одной большой капле (примерно 0.1 мл) рядом с надписями первого ряда в соответствии с маркировкой; Стандартные эритроциты 0, А и В наносятся по одной маленькой капле (примерно 0.03 мл) рядом с надписями второго ряда в соответствии с маркировкой; С помощью пипетки, сыворотка исследуемой крови берется из пробирки и помещается рядом с каждым стандартным эритроцитом (по большой капле, примерно 0.1 мл); Этой же пипеткой берутся эритроциты исследуемой крови и помещаются рядом с каждым цоликлоном (по маленькой капле, примерно 0,03 мл); С помощью стеклянных палочек каждую каплю исследуемого образца следует перемешать с соответствующим диагностикумом. Для каждого перемешивания следует использовать новую палочку (итого: 6 штук); При постоянном покачивании планшета наблюдать за реакцией в течении 3 минут по песочным часам. Положительная реакция выражается в агглютинации эритроцитов - образовании видимых глазом каплевидных сгустков и хлопьев. При отрицательном результате смешанная капля остается окрашенной в красный цвет равномерно. По результатам теста возможны четыре комбинации: Агглютинация наблюдается со стандартными эритроцитами А и В и отсутствует со всеми цоликлонами и стандартными эритроцитами 0, это группа крови 0; Агглютинация наблюдается со стандартными эритроцитами В и цоликлонами анти-А, анти-АВ, но отсутствует с цоликлоном анти-В и стандартными эритроцитами 0 и А, это группа крови А; Агглютинация наблюдается со стандартными эритроцитами А и цоликлонами анти-В, анти-АВ, но отсутствует с цоликлоном анти-А и стандартными эритроцитами 0 и В, это группа крови В; Агглютинация наблюдается со всеми цоликлонами и отсутствует со всеми стандартными эритроцитами, это группа крови АВ. В последнем случае необходимо провести дополнительный тест для исключения неспецифической агглютинации. Для этого на планшете перемешивают каплю физраствора (0,9% водный хлорид натрия) и каплю эритроцитов исследуемой крови. Полученная капля должна оставаться равномерно окрашенной (отсутствие агглютинации) в течение пяти минут.